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生工生物&AMBiotech X-Aptamer核酸适配体服务平台

 

技術支持


電話:021-37772245
郵箱:service7@sangon.com

服務簡介

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核酸适配体(Aptamer)或核酸适体是一类具有特异性识别功能的单链DNA或者RNA核酸分子,其作用本质是核酸分子折叠形成特定三维结构而与生物靶标高亲和力和高特异性结合,具有与单克隆抗體相媲美的亲和力与特异性,同时又具有抗體無法媲美优点:不易受pH、温度等环境因素影响而变性、价格便宜;可在体外筛选;没有免疫源性和毒性,可通过化学合成制备、改造与标记;化学稳定性好,能可逆变性与复性、可通过酶扩增、剪切等。这些优点使其在生物医学领域具有广阔的应用前景,因此在基础研究及应用研究领域均呈现了快速发展的趋势。而传统的适配体筛选方法是通过随机序列文库分子与靶标孵育结合后,经过分离,再扩增再结合,通过10~15轮的筛选,甚至更多轮的筛选,耗时耗力,而且成功率只有30%左右。

生工生物專注于上遊核酸適配體文庫的合成與篩選,爲主動搶占科研領域制高點,積極尋求國際合作機遇,經過對全球適配體篩選服務公司的精心考察與分析,2018年生工生物決定與美國AM生物有限公司達成戰略合作聯盟,引進AM生物公司的高親和力修飾適配體篩選試劑盒,共同建立高質量的核酸適配體篩選平台,爲廣大科研工作者提供更加高效、高質量的適配體篩選服務及高親和力核酸適配體。美國AM生物公司開發的高親和力修飾適配體(以下用X-Aptamer表示)篩選試劑盒提供了一種快速篩選高親和力修飾適配體的方法,獲得多項發明專利:

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  • US 7,576,037 Bead library synthesizer
  • US 7,910,523 Bead-based selection process
  • US 7,338,762 Bead-based selection methods
  • AU 2003304278 B2 Bead-based combinatorial oligonucleotide library
  • Canada 2,526,690 Bead-based selection methods and system
  • EPO 1635765 Bead-based selection methods and system
  • US 13/014,597 (pending) System for selecting affinity reagents using oligos attached to beads by non-cleavable linker

說明書下載

高親和力修飾適配體篩選X-Aptamer試劑盒I
高親和力修飾適配體篩選X-Aptamer試劑盒II

X-Aptamer核酸適配體篩選平台優點

X-Aptamer篩選試劑盒與傳統適配體篩選比較

內容 傳統適配體庫 X-Aptamer X-Aptamer優點說明
庫容量 1014~20 109 傳統隨機庫中絕大多數都是無效序列,X-Aptamer是經過計算機分析舍棄無效序列,保留具特異空間結構序列,大大減輕了篩選負荷。
每條序列的重複數(以2OD計算) 0~101 105 因为传统随机库庫容量过大,每种碱基序列在0~10条,丰度极低,很难富集,必须要进行多轮筛选。
堿基修飾 X-Aptamer含有新穎的化學修飾,包括二硫代磷酸酯骨架修飾、脫氧核糖核酸、正電修飾及氨基酸側鏈修飾,從而使與靶標的親合力增強上百倍,甚至上千倍。
一次篩選靶標數量 1個 3~5個 X-Aptamer 正是由于上述的三大特点,可以一次性同时进行5个靶标的筛选,提高筛选效率。
篩選循環數量 10~15輪 1轮筛选+1录堘合 一輪靶標分子與X-Aptamer庫篩選,二輪靶標與特異性適配體結合pull-down分離,操作簡單、省時省力。
篩選成功率 30% 70% 由于X-Aptamer库含有多种堿基修飾,其空间结构多样性及亲和性增强,大大提高了篩選成功率。
序列分析 一代或二代測序得堿基序列 二代測序+專業軟件 通過標記引物得出多個靶標適配體序列,並通過AM的雲端智能軟件分析出修飾的適配體核酸序列。

X-Aptamer 模式图及修饰碱基

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X-Aptamer 与無修饰适配体亲和力比较

Target Regular Aptamer KD, unmodified Modification Made X-Aptamer KD, modified Binding Affinity Enhancement
VEGF165 2.1 nM PS2 15 pM 140x
FS2 2.3 pM 913x
α-Thrombin 1.1 nM PS2 1.2 pM 916x
α-Thrombin 2.4 nM T-indole 1.4 pM 1700x
IgE 11.3 nM PS2 10.4 pM 1000x

相關文獻

  1. [1] Lokesh G.L. et al. (2017) X-Aptamer Selection and Validation. In: Bindewald E., Shapiro B. (eds) RNA Nanostructures. Methods in Molecular Biology, vol 1632. Humana PressLink

  2. [2] HongyuWang, Curtis H.Lam, XinLi, Derek L.West, XianbinYang, Selection of PD1/PD-L1 X-Aptamers. Biochimie, Biochi. 2017.09.006Link

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服務流程

目前生工生物可提供两种服务方式,客户筛选和生工筛选。您可选择把靶分子寄给生工,由生工进行后续一系列的筛选、分析及适配体合成等一条龙服务;也可选择自行购买该试剂盒筛选,并将得到的PCR产物寄给生工做后续的相应服务。服務流程图如下:

客戶篩選:

客户从生工购买AMBiotech X-Aptamer筛选试剂盒→客户自行筛选→筛选到PCR产物→寄到生工进行二代測序→AMBiotech数据分析→生工合成X-Aptamer→特异性及亲和力分析

生工篩選:

客戶寄靶分子給生工→生工篩選→篩選到PCR産物→二代測序→AMBiotech數據分析→生工合成X-Aptamer→特異性及親和力分析

服務說明

  1. 1. 本试剂盒主要针对蛋白和小分子靶标,并且靶标能进行稳定标记;
  2. 2. 对于细胞,或混合靶标需要客户自己摸索相关的筛选条件;
  3. 3. 客户自己筛选直接购买试剂盒,如需要公司帮助筛选,需要客戶提供详细的蛋白信息;
  4. 4. 蛋白及小分子干粉样品带普通冰袋运输,溶液样品需要干冰运输。
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X-Aptamer試劑盒實驗流程圖

服務價格與周期

服务內容 單價(元) 周期
X-Aptamer kit I(需要自备蛋白标记试剂等) 詢價 3天
X-Aptamer kit II(無需自备试剂) 詢價 3天
X-Aptamer 筛选服务 詢價 2~4周
二代測序 詢價 5~8天
數據分析及適配體合成(50nmol/個) 詢價 4~6周
EMSA特異性分析 詢價 1~2周
QPCR親和力分析 詢價 2~3周

客戶提供

提供樣品

靶蛋白或小分子靶(應使用適當的生物素、組氨酸或其他合適的物質示蹤或標記。在很多情況下,重組的靶蛋白已經含有谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)或組氨酸等標記,這樣靶蛋白就不需要標記。)

如客戶自行篩選後續還需要提供PCR産物。

提供信息

X-Aptamer高親和力修飾適配體服務訂單下載

最終交付

交付報告

特異性及親和力分析報告